BMP-2/大鼠骨成型蛋白2檢測試劑盒
簡介
骨成型蛋白2或BMP-2屬于TGF-β超家族蛋白。BMP-2與其他骨形態發生 蛋白一樣，在骨和軟骨的發育中起著重要作用。它參與刺猬途徑、TGF-β信號 途徑以及細胞因子-細胞因子受體的相互作用。 它還參與心肌細胞分化和上皮 細胞向間質的轉化。與BMP家族的許多其他蛋白一樣 ， BMP-2已被證明能有 效地誘導各種類型的細胞進行成骨細胞分化。 BMP-2可能參與白色脂肪的形 成 ，并可能有代謝作用。 骨成型蛋白2已被證明與BMPR1A相互作用。

本試劑盒大鼠BMP-2免疫測定是一種三步法固相夾心ELISA，用于測量細 胞培養上清液、血清和血漿中的大鼠BMP-2。試劑盒包含大腸桿菌表達重組  大鼠BMP-2和針對重組蛋白產生的抗體。使用天然大鼠BMP-2獲得的結果顯 示出與使用重組標準品獲得的標準曲線平行的線性曲線。這些結果表明，該試 劑盒可用于測定天然大鼠BMP-2的相對質量值。

檢測原理

試劑盒采用雙抗體夾心法ELISA技術：將捕獲抗體包被于酶標板上 ，捕獲  樣品及標準品中的待測物BMP-2 ， 孵育清洗后 ，再加入標記的檢測抗  體進行孵育后清洗，形成“捕獲抗體-抗原-檢測抗體"免疫復合物 ，隨后加入  鏈霉親和素偶聯的辣根過氧化物酶進行孵育 ，待孵育結束后清洗 ，接著加入  TMB顯色液后 ，若樣本中有待測物則顯藍色 ，則加入終止液停止反應。檢測  過程中游離的成分均被洗去，用酶標儀在450nm處測OD值，顏色的深淺和樣  品中的待測物的含量呈正比，通過繪制標準曲線計算出樣本中BMP-2的濃度。

操作要點

1. 混合蛋白質溶液時，應始終避免起泡。為了避免交叉污染，在添加每個標準品、樣品和試劑時應更換移液器槍頭。此外，每種試劑應單獨使用容器。

2. 確保試劑不間斷地添加到板孔中。為了確保準確的結果，在孵育步驟中需要粘合好封板膜。

3. 當使用自動洗板機時，在加入洗滌緩沖液后加入30秒的浸泡期，或者在洗滌步驟之間將板旋轉180度，可以提高測定精度。

4. 顯色劑應保持無色，直到添加到板中。確保顯色劑不受光線照射。顯色劑應從無色變為藍色。

5. 應按照與顯色劑相同的順序將終止液添加到板中。加入終止液后，孔中形成的顏色將從藍色變為黃色。綠色的孔表示終止液未與基質溶液充分混合。

需要的其他材料

1. 酶標儀，包含450nm測定波長，同時包含600-680nm校正波長更佳；

2. 移液器及槍頭；

3. 蒸餾水或去離子水；

4. 100-1000 mL刻度量筒；

5. 洗瓶、排槍或自動微孔板清洗機；

6. 水平軌道微孔板振蕩器，能夠保持500±50 rpm的速度；

7. 用于稀釋標準品和樣品的試管。
注意事項

1. 本試劑盒提供的終止液為稀硫酸溶液，具有一定腐蝕性，應謹慎操作。

2. 本試劑盒中的某些成分含有防腐劑，可能會引起皮膚過敏反應，應佩帶口罩避免吸入薄霧。

3. 顯色劑B可能會引起皮膚、眼睛和呼吸道刺激，應佩帶口罩避免吸入薄霧。

4. 佩戴防護手套、眼睛和面部防護用品，處理后洗手。

試劑準備

1. 使用前將所有試劑置于室溫平衡30分鐘左右。

2. 洗滌液/稀釋液配置：如果洗滌液/稀釋液（20×）有晶體析出，需在37℃下加熱?晶體全部溶解。用蒸餾水1: 20稀釋（例如：1mL濃縮洗滌液加入19mL的蒸餾水）
BMP-2/大鼠骨成型蛋白2檢測試劑盒
標準品配置

試劑盒中取出標準品，準備7個試管，先從20ng/mL標準品（200 μL） 按需吸取一定量用1 ×稀釋液稀釋1000pg/mL（例： 50μL的標準品母液 +950μL的1 ×稀釋液，制備得到1000μL的1000pg/mL濃度標準品），隨后在6個試管中分別加入500μL的1 ×稀釋液 ，在這6個單獨的試管中1000pg/mL 標準品依次2倍倍比稀釋至6個梯度 ， 共配制7個濃度的標準品 ， 依次為： 1000pg/mL 、  500pg/mL 、  250pg/mL 、  125pg/mL 、  62.5pg/mL、31.25pg/mL、  15.625pg/mL ，從濃度標準品溶液中吸取500μL標準品  到下一個試管中，輕輕吹打混勻，以此類推進行標準品的倍比稀釋（如圖所示）， 1 ×稀釋液用作零濃度標準品(0pg/mL)。

結果的計算
計算標準品和樣本復孔的平均OD值并減去空白孔的OD值作為校正值。以濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出四參數邏輯函數的標準曲線（作圖時去掉空白組的值）或者使用能夠生成四參數邏輯（4-P）曲線擬合的計算機軟件來創建標準曲線。若樣品OD值高于標準曲線上限，應適當稀釋后重測并在計算樣本濃度時乘以相應的稀釋倍數。
示例數據
以下數據和曲線僅供參考，實驗者需根據自己的實驗數據建立標準曲線。

本圖所示標準曲線僅供示例，結果計算應以同次試驗標準品所繪標準曲線為準計算樣本結果
靈敏度

經樣本測試，本試劑盒的檢測靈敏度7.81pg/mL。

特異性

該試劑盒測定可識別天然和重組大鼠BMP-2。

其他相關蛋白在稀釋緩沖液中制備為50ng/mL，并測定交叉反應性。沒有觀察到明顯的交叉反應。

實驗步驟匯總
1. 加標準品及樣品，37℃避光反應1.5h，洗滌3次。

2. 加檢測抗體，37℃避光反應1h，洗滌4次。

3. 加酶結合物，37℃避光反應30分鐘，洗滌4次。

4. 加顯色液，37℃避光反應15分鐘。

5. 加終止液，在5分鐘內讀數。

大鼠骨成型蛋白2用于定量檢測細胞培養上清、血清、血漿中大鼠的BMP-2使用本產品之前，必須完整閱讀本說明書，大鼠ELISA試劑盒僅供科研使用，不能于其它診斷。