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小鼠海藻糖酶(TREH)檢測(cè)試劑盒

小鼠海藻糖酶(TREH)檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品時(shí)間:2026-04-16

簡要描述:

小鼠海藻糖酶(TREH)檢測(cè)試劑盒也被稱為TREH,是由TREH基因編碼的酶,它是糖苷水解酶,由小腸刷狀緣中的細(xì)胞產(chǎn)生,催化海藻糖向葡萄糖的轉(zhuǎn)化,它在大多數(shù)動(dòng)物中被發(fā)現(xiàn),非還原性雙糖海藻糖(α-D-吡喃葡萄糖基-1,1-α-D-吡喃葡萄糖苷)是最重要的儲(chǔ)存碳水化合物之一。

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小鼠海藻糖酶(TREH)檢測(cè)試劑盒
簡介  
海藻糖酶(trehalase),也被稱為TREH,是由TREH基因編碼的酶,它是糖苷水解酶,由小腸刷狀緣中的細(xì)胞產(chǎn)生,催化海藻糖向葡萄糖的轉(zhuǎn)化,它在大多數(shù)動(dòng)物中被發(fā)現(xiàn),非還原性雙糖海藻糖(α-D-吡喃葡萄糖基-1,1-α-D-吡喃葡萄糖苷)是最重要的儲(chǔ)存碳水化合物之一,幾乎由除哺乳動(dòng)物以外的所有生命形式產(chǎn)生,二糖通過酶海藻酶水解成兩個(gè)葡萄糖分子,在釀酒酵母中發(fā)現(xiàn)了兩種類型的海藻酶,即中性海藻酶(NT)和酸性海藻酶(AT),根據(jù)其pH值分類,NT的最佳pH值為7.0,而AT的最佳pH值為4.5,有報(bào)道稱,釀酒酵母中超過90%的總AT活性是細(xì)胞外,并將細(xì)胞外海藻糖切割成質(zhì)周空間中的葡萄糖。

檢測(cè)原理

本試劑盒采用雙抗體夾心法ELISA技術(shù):將捕獲抗體包被于酶標(biāo)板上,捕獲樣品及標(biāo)準(zhǔn)品中的待測(cè)物TREH,清洗后,再加入標(biāo)記的檢測(cè)抗體進(jìn)行孵育后清洗,形成“捕獲抗體-抗原-檢測(cè)抗體"免疫復(fù)合物,隨后加入鏈霉親和素偶聯(lián)的辣根過氧化物酶進(jìn)行孵育,待孵育結(jié)束后清洗,接著加入TMB顯色后,若樣本中有待測(cè)物則顯藍(lán)色,加入終止液停止反應(yīng)。檢測(cè)過程中游離的成分均被洗去,用酶標(biāo)儀在450 nm處測(cè)OD值,顏色的深淺和樣品中的待測(cè)物的含量呈正比,通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣本中TREH的濃度。

操作要點(diǎn)

1. 混合蛋白質(zhì)溶液時(shí),應(yīng)始終避免起泡。為了避免交叉污染,在添加每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品、樣品和試劑時(shí)應(yīng)更換移液器槍頭。此外,每種試劑應(yīng)單獨(dú)使用容器。

2. 確保試劑不間斷地添加到板孔中。為了確保準(zhǔn)確的結(jié)果,在孵育步驟中需要粘合好封板膜。

3. 當(dāng)使用自動(dòng)洗板機(jī)時(shí),在加入洗滌緩沖液后加入30秒的浸泡期,或者在洗滌步驟之間將板旋轉(zhuǎn)180度,可以提高測(cè)定精度。

4. 顯色劑應(yīng)保持無色,直到添加到板中。確保顯色劑不受光線照射。顯色劑應(yīng)從無色變?yōu)樗{(lán)色。

5. 應(yīng)按照與顯色劑相同的順序?qū)⒔K止液添加到板中。加入終止液后,孔中形成的顏色將從藍(lán)色變?yōu)辄S色。綠色的孔表示終止液未與基質(zhì)溶液充分混合。

需要的其他材料

1. 酶標(biāo)儀,包含450nm測(cè)定波長,同時(shí)包含600-680nm校正波長更佳;

2. 移液器及槍頭;

3. 蒸餾水或去離子水;

4. 100-1000 mL刻度量筒;

5. 洗瓶、排槍或自動(dòng)微孔板清洗機(jī);

6. 水平軌道微孔板振蕩器,能夠保持500±50 rpm的速度;

7. 用于稀釋標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的試管。

注意事項(xiàng)

1. 本試劑盒提供的終止液為稀硫酸溶液,具有一定腐蝕性,應(yīng)謹(jǐn)慎操作。

2. 本試劑盒中的某些成分含有防腐劑,可能會(huì)引起皮膚過敏反應(yīng),應(yīng)佩帶口罩避免吸入薄霧。

3. 顯色劑B可能會(huì)引起皮膚、眼睛和呼吸道刺激,應(yīng)佩帶口罩避免吸入薄霧。

4. 佩戴防護(hù)手套、眼睛和面部防護(hù)用品,處理后洗手。 

試劑準(zhǔn)備

1. 使用前將所有試劑置于室溫平衡30分鐘左右。

2. 洗滌液/稀釋液配置:如果洗滌液/稀釋液(20×)有晶體析出,需在37℃下加熱?晶體全部溶解。用蒸餾水1: 20稀釋(例如:1mL濃縮洗滌液加入19mL的蒸餾水)

標(biāo)準(zhǔn)品配置

試劑盒中取出標(biāo)準(zhǔn)品,準(zhǔn)備7個(gè)試管,先從800ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品(200μL)按需吸取一定量用1×稀釋液稀釋至40ng/mL(例:50μL的標(biāo)準(zhǔn)品母液+950μL的1×稀釋液,制備得到1000μL的40ng/mL濃度標(biāo)準(zhǔn)品),隨后在6個(gè)試管中分別加入500μL的1×稀釋液,在這6個(gè)單獨(dú)的試管中將40ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品依次2倍倍比稀釋至6個(gè)梯度,共配制7個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,依次為:  40ng/mL、  20ng/mL、 10ng/mL、 5ng/mL、  2.5ng/mL、 1.25ng/mL、 0.625ng/mL,從最高濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液中吸取500μL標(biāo)準(zhǔn)品到下一個(gè)試管中,輕輕吹打混勻,以此類推進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品的倍比稀釋(如圖所示),1×稀釋液用作零濃度標(biāo)準(zhǔn)品(0ng/mL)。

小鼠海藻糖酶(TREH)檢測(cè)試劑盒


結(jié)果的計(jì)算

計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品和樣本復(fù)孔的平均OD值并減去空白孔的OD值作為校正值。以濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出四參數(shù)邏輯函數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(作圖時(shí)去掉空白組的值)或者使用能夠生成四參數(shù)邏輯(4-P)曲線擬合的計(jì)算機(jī)軟件來創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。若樣品OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限,應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測(cè)并在計(jì)算樣本濃度時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

示例數(shù)據(jù)

以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考,實(shí)驗(yàn)者需根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/mL)

40

20

10

5

2.5

1.25

0.625

0

OD

2.486

1.719

0.997

0.619

0.426

0.262

0.168

0.068

校正OD

2.418

1.651

0.929

0.551

0.358

0.194

0.1

0

小鼠海藻糖酶(TREH)檢測(cè)試劑盒

本圖所示標(biāo)準(zhǔn)曲線僅供示例,結(jié)果計(jì)算應(yīng)以同次試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)品所繪標(biāo)準(zhǔn)曲線為準(zhǔn)計(jì)算樣本結(jié)果
靈敏度

經(jīng)樣本測(cè)試,本試劑盒的檢測(cè)靈敏度為0.31ng/mL。

特異性

該試劑盒測(cè)定可識(shí)別重組小鼠TREH

其他相關(guān)蛋白在稀釋緩沖液中制備為50ng/mL,并測(cè)定交叉反應(yīng)性。沒有觀察到明顯的交叉反應(yīng)。

小鼠海藻糖酶(TREH)檢測(cè)試劑盒
實(shí)驗(yàn)步驟匯總 
1. 加標(biāo)準(zhǔn)品及樣品,37℃避光反應(yīng)1.5h,洗滌3次。

2. 加檢測(cè)抗體,37℃避光反應(yīng)1h,洗滌4次。

3. 加酶結(jié)合物,37℃避光反應(yīng)30分鐘,洗滌4次。

4. 加顯色液,37℃避光反應(yīng)15分鐘。

5. 加終止液,在5分鐘內(nèi)讀數(shù)

小鼠海藻糖酶ELISA檢測(cè)試劑盒用于定量檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清、血清、血漿中小鼠TREH使用本產(chǎn)品之前,必須完整閱讀本說明書小鼠ELISA試劑盒僅供科研使用,不能于其它診斷

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