ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定，它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。此項(xiàng)技術(shù)自70年代初問世以來，發(fā)展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域。
ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。
由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在實(shí)際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測抗體的間接法、用于檢測抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。
根據(jù)試劑的來源和標(biāo)本的性狀及檢測的具備條件，可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測方法。
1. 競爭法測抗原
首先將特異性抗體包被于固相載體表面，經(jīng)洗滌后分成兩組：一組加酶標(biāo)記抗原和被測抗原的混合液，另一組只加酶標(biāo)記抗原，經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色，這兩組底物降解量之差，即為所要測定的未知抗原的量。此方法測定的抗原只要有一個(gè)結(jié)合部位即可，對小分子抗原如激素和藥物類的測定常用此法。優(yōu)點(diǎn)是快，缺點(diǎn)是需要較多量的酶標(biāo)記抗原。
2. 雙抗體夾心法測抗原
針對抗原分子上兩個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體。適用于測定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原，不適用于測定半抗原及小分子單價(jià)抗原，因其不能形成兩位點(diǎn)夾心。
3. 免疫抑制法測抗原
被檢標(biāo)本對底物顯色的抑制程度與標(biāo)本中所含抗原的量成正比，二者之差即為預(yù)測抗原的量。
4. 間接法測抗體
檢測抗體很常用的方法，原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體以檢測已與固相結(jié)合的受檢抗體。
本法只要更換不同的固相抗原，可以用一種酶標(biāo)抗體檢測各種與抗原相應(yīng)的抗體。主要用于對病原體的檢測而進(jìn)行傳染病的診斷。
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