酶聯(lián)免疫試劑盒是較普遍常用的藥物殘留檢測(cè)方法，與儀器分析技術(shù)相比具有快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確和靈敏度高等特點(diǎn)，但對(duì)實(shí)驗(yàn)操作條件的要求比較嚴(yán)格。實(shí)驗(yàn)條件主要由實(shí)驗(yàn)室的操作環(huán)境和操作人員的操作熟練程度兩方面組成，但ELISA試劑盒對(duì)實(shí)驗(yàn)室操作環(huán)境的要求是幾種藥物殘留檢測(cè)方法中相對(duì)較低的。由于大部分的試驗(yàn)操作步驟都是由實(shí)驗(yàn)人員來(lái)完成的，人為的誤差相對(duì)嚴(yán)重一些。本人結(jié)合幾年的工作實(shí)踐介紹一下進(jìn)行ELISA操作的時(shí)候應(yīng)該注意的問題。
酶聯(lián)免疫試劑盒操作的通用的規(guī)則
1 .要確保微量加樣器的準(zhǔn)確性，可以使用蒸餾水和電子天平進(jìn)行確定(由于蒸餾水不含雜質(zhì)，溫度環(huán)境為20％左右時(shí)，lmL的水可以看作是lg、200 L的水可以看作是0．2g)每一把微量加樣器都應(yīng)該將其高量程和zui低量程進(jìn)行確定。
2. 在使用微量加樣器時(shí)，吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭，即使吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3. 吸取液體時(shí)速度不易太快，以免產(chǎn)生氣泡，吸取的量不夠準(zhǔn)確。
4. 將液體加到酶標(biāo)孔中時(shí)，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸，可使槍頭上的液滴和孑L壁接觸，液滴會(huì)自然流下去。吸入液體時(shí)的的方法是吸兩檔打一檔，防止由于槍頭的毛細(xì)作用使得部分液體不能流出而造成的誤差。
5. 吸取液體時(shí)要選用量程和需要量接近的微量加樣器吸，減少誤差。
6 .液體全部加入酶標(biāo)孔后，將酶標(biāo)板放在桌子上平行輕輕搖晃30s，使液體充分混合均勻，也使其得到充分的反應(yīng)。
7. 孵育時(shí)要使蓋板膜封好酶標(biāo)板，防止水分蒸發(fā)，以防曲線不成線性。
8 .實(shí)驗(yàn)前30min將試劑盒中的所有試劑從冰箱取出，使試劑盒中的所有試劑與提取好的樣品溶液的溫度相同，酶標(biāo)板只要取出所需量。
9. 由于底物顯色劑對(duì)光及其敏感，因此要避光保存。
10 .手工洗板時(shí)每次加入洗滌液后。應(yīng)靜置15～30s，不要將一個(gè)酶標(biāo)孑L中的洗滌液濺入另一酶標(biāo)孔中，防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標(biāo)板放在毛巾或吸水紙上拍干。
11 .檢測(cè)吸光度前應(yīng)將酶標(biāo)儀打開，將其預(yù)熱30min以上。
12. 底物為TMB，避免與皮膚相接觸。終止液為2tool的濃硫酸具有腐蝕性，應(yīng)盡量避免接觸皮膚
13 .孵育的時(shí)間應(yīng)該嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書上的時(shí)間為準(zhǔn)。
14 .要盡量做雙孔實(shí)驗(yàn)，這樣才既能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，又能反映出試劑盒的精密度。
15. 對(duì)樣本的結(jié)果有疑問時(shí)需要使用其他檢測(cè)方法進(jìn)行驗(yàn)證。
16 .沒有去離子水或雙蒸水時(shí)，可以使用娃哈哈純凈水配制溶液，切勿使用自來(lái)水。
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